Hur man utför ett gramfärg

Gramfärgning är ett snabbt förfarande som används för att verifiera förekomsten av bakterier i vävnadsprover och att identifiera dem som gram-positiva eller gramnegativa, baserat på deras cellväggers kemiska och fysiska egenskaper. Gramfärg bör alltid vara det första steget i att diagnostisera en bakteriell infektion.

Denna praxis är uppkallad efter den danska forskaren Hans Christian Gram (1853-1938), som utvecklade den 1882 och publicerade den 1884, som en teknik för att skilja två typer av bakterier med liknande kliniska symptom: Streptococcus pneumoniae (även känd som pneumokocker) och Klebsiella pneumoniae

steg

Del 1

2

Sterilisera bilden. Om det är smutsigt, tvätta det med tvål och vatten för att avlägsna fett och smuts. Desinficera sedan med etanol, en glasrenare eller någon annan metod som rekommenderas av laboratorieprocedurerna där du arbetar.

3

Lägg ett enkelt prov på bilden. Du kan använda Gramfärgningstekniken för att identifiera de bakterier som finns närvarande på ett medicinskt prov eller odlingen av en petriskål. För att en gramfärgning ska vara användbar måste du lägga till en tunn provskikt på färgämnet. Det är bättre att arbeta på ett prov som inte är äldre än 24 timmar, eftersom efter denna tid finns det större risk att bakteriens cellmembran är skadade och därför är färgen mindre effektiv och exakt.

4

Värm provet för att fixera smeten. Värmen medger att provet klibbar på glidbanan så att den inte går vilse under sköljningsprocessen. Skjut gliden snabbt två eller tre gånger över en Bunsen-brännare eller använd en speciell elvärmare. Försök dock inte överhettas med smet för att förhindra att det snedvrids. Om du använder Bunsen näbb, justera flamman så att den är en liten blå, inte lång och apelsinkon.

5

Placera bilden på färgfacket. Det är en liten grundfett av plast, glas eller metall med en grill eller trådnät på toppen. Placera bilden över det här nätet så att de använda vätskorna kan springa in i plattan nedan.

Del 2

2

Skölj kristallviolen försiktigt. Kantla bilden och använd en sprayflaska för att tvätta den med en ljus ström av destillerat vatten eller kran. Vattnet ska flöda på smet utan att flödet direkt slår på det. Överdriv inte denna operation eftersom du kan ta bort fläcken från de gram-positiva bakteriecellerna.

3

Skölj provet med jod och sedan med vatten. Också i detta fall använd en pipett och täcka smeten med jod. Vänta 60 sekunder och skölj sedan med samma metod som beskrivs ovan. Jod, i form av negativa joner, interagerar med CV + -katjoner för att bilda större kristallina och jod (CV-I) komplex mellan de inre och yttre cellerna. Denna fas tillåter den lila färgen att fixa på cellerna där den har absorberats.

4

Vid detta tillfälle avfärgas provet och fortsätter till en snabb sköljning. För denna fas användes vanligtvis en blandning av lika delar aceton och etanol. Blekningstiden bör övervakas mycket noggrant. Ta tag i bilden och luta den, tillsätt blekmedlen tills du inte längre märker den lila färgen i sköljflödet. I allmänhet tar det 10 sekunder flöde med bleken (eller ännu mindre om koncentrationen av aceton i blandningen är hög). Så snart all gentian violet har tagits bort från både gram-positiva och negativa celler, sluta eller du måste repetera om igen. Skölj omedelbart sköljmedelsflödet med användning av det ovan beskrivna förfarandet.

5

Torka ut smeten med bakgrundsfärgen och skölj den sedan. Bakgrundsfärgen, mestadels safranin eller fuchsin, används för att öka kontrasten mellan gram-positiva och gramnegativa bakterier genom att färga den senare (som blivit blekt av aceton) av rosa eller rött. Lämna det andra färgämnet på plats i minst 45 sekunder och skölj det sedan.

6

Torkar bilden. Du kan vänta på att torka i luften eller använda absorberande papper som är särskilt konstruerat för detta ändamål. Gramfärg är nu klar.

Del 3

2

Erkänna gram-positiva och gramnegativa bakterier. Det undersöker bilden med ljusmikroskopet - de positiva bakterierna kommer att vara lila på grund av den kristallina violeten som fångas i sina tjocka cellmembran. Gram-negativ kommer att vara rosa eller röd, eftersom gentian violet har "tvättats bort" av sina tunncelliga väggar och bakgrundsfärgen har trängt in.

3

Kontrollera referensbilderna. Om du inte är säker på vilka bakterier det är kan du kolla in en samling bilder, katalogiserad av gramform och färgning. Du kan hitta många databaser online. För att göra identifikationen enklare, kategoriseras de vanligaste eller mest medicinskt relevanta bakterierna av Gram fläck och form.

4

Känna igen gram-positiva bakterier baserat på formuläret. Bakterierna, såväl som för färgningen, grupperas också enligt formen som visas under mikroskopet. De vanligaste är "cocci" (sfäriska) eller stavarna (cylindriska). Här är några exempel på gram-positiva bakterier (färgad lila) klassificerad av form:

5

Identifierar gramnegativa bakterier. Dessa är färgade rosa och klassificeras oftast i tre grupper. Kokosnötter med en sfärisk form, långa och smala stavar och slutligen coccoidsna som är en mellersta väg.

6

Betygsätt blandade resultat. Vissa bakterier är svåra att utvärdera exakt på grund av deras bräckliga eller ogenomsläppliga cellväggar. De kan visa en blandad lila och rosa färg eller olika färger för bakterier av samma typ som finns i samma smet. Alla prover som är äldre än 24 timmar presenterar detta problem, men det finns stammar av bakterier som är svåra att upptäcka vid varje steg. I detta fall behövs specifika test för att minska utbudet av möjligheter och uppnå deras identifiering, såsom Ziehl-Neelsen-färgning, kulturobservation, genetisk testning och TSI-agar.

7

Kassera materialet. Förfaranden för eliminering av materialbyte från laboratorium till laboratorium baserat på samma typ av material. Vanligen elimineras vätskorna i färgningsbrickan som farligt avfall efter att de förseglas i speciella flaskor. Glidbanorna steriliseras i en 10% blekmedel och avlägsnas sedan som skarpa instrument.